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人宮頸癌癌細胞HELA培養基及培養凍存條件準備

更新更新時間:2022-08-10 瀏覽次數:1978

  人宮頸癌癌細胞HELA培養基及培養凍存條件準備:
  
  1、準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),90%;北美胎牛血清(UnitedStates,GIBCO,貨號16000-044),10%。
  
  2、培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
  
  3、凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
 
  

人宮頸癌癌細胞HELA

 
 

  人宮頸癌癌細胞HELA處理:
  
  1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
  
  2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
  
  對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
  
  (1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。
  
  (3)輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養液后吹勻。
  
  (4)移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
  
  3、人宮頸癌癌細胞HELA凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行,最后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心,用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中。

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