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說說人表皮永生化細胞HACAT的培養(yǎng)步驟

更新更新時間:2023-06-16 瀏覽次數(shù):3010

  說說人表皮永生化細胞HACAT的培養(yǎng)步驟。
  1、復蘇細胞:在37℃水浴中快速搖動裝有1mL細胞懸液的冷凍管融化,加入5mL培養(yǎng)基并充分混合。在1000RPM下離心5分鐘,棄去上清液,加入4-6mL*培養(yǎng)基并充分吹掃。然后將所有細胞懸浮液添加到培養(yǎng)瓶中,并培養(yǎng)過夜(或將細胞懸浮液添加到6cm皿中)并培養(yǎng)過夜。第二天換培養(yǎng)基,檢查細胞密度。
  2、細胞傳代:如果細胞密度達到80%-90%,則可以傳代培養(yǎng)。
 

人表皮永生化細胞HACAT

  對于貼壁人表皮永生化細胞HACAT ,傳代可參考以下方法:
  (1)棄去培養(yǎng)上清液,并用不含鈣和鎂離子的PBS沖洗細胞1-2次。
  (2)向培養(yǎng)瓶中加入1-2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA),將其置于37℃的培養(yǎng)箱中1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞的消化情況,如果大部分細胞旋轉并掉落后,迅速將其帶回手術臺,輕敲培養(yǎng)瓶幾次,并加入5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
  (3)輕輕吹干細胞,然后將其*吸出。以1000RPM離心8-10分鐘,棄去上清液,加入1-2mL培養(yǎng)基并充分吹掃。
  (4)加入5-6ml/瓶培養(yǎng)液,然后將細胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶,其中裝有5-6ml培養(yǎng)液的比例為1:2至1:5。
  對于懸浮人表皮永生化細胞HACAT,傳代可參考以下方法:
  (1)收集細胞,以1000RPM離心8-10分鐘,棄去上清液,并加入1-2mL培養(yǎng)基吹凈,然后將細胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶,其中含有8ml培養(yǎng)基,比例為1:2至1:5。
  (2)可以選擇一半的介質更換方法。丟棄一半培養(yǎng)基后,懸浮剩余的細胞,然后將細胞懸浮液分成新的含有8ml培養(yǎng)基的細胞懸浮液,比例為1:2至1:3。在盤子或瓶子里。
  3、細胞凍存:當細胞生長良好時,可以將其冷凍保存。將貼壁細胞冷凍保存后,棄去培養(yǎng)基并加入少量胰蛋白酶。細胞變成圓形并脫落后,通過離心收集它們。

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